序言：寫(xiě)作是分享個(gè)人見(jiàn)解和探索未知領(lǐng)域的橋梁，我們?yōu)槟x了8篇的減肥健身計(jì)劃樣本，期待這些樣本能夠?yàn)槟峁┴S富的參考和啟發(fā)，請(qǐng)盡情閱讀。

第1篇

【關(guān)鍵詞】 水飛薊素 腎小管間質(zhì)纖維化 腎小管上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化 轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1

【Abstract】 Objective To explore the effect of silymarin on epithelial-mesenchymal transition (EMT) in rats with tubulointerstitial fibrosis induced unilateral ureteral obstruction. Methods 56 Sprague-Dawley rats were randomly pided into three groups: operated group(n=24)， silymarin treated group（n=24）and sham-operated group(n=8).Renal tubulointerstitial fibrosis model was established via unilateral ureteral obstruction(UUO). In operated group and treated group， eight rats were killed at the 7d， 14d and 21d after operation to examine the histological changes of renal tissue， but all 8 rats in sham-operated group were only killed at 21d. Histological changes were observed in tubulointerstitial injury under microscope.The expression of transforming growth factor- beta1（TGF-β1）and α-smooth muscle action(α-SMA) in renal tissue were determined with immunohistochemical method， respectively. Results Renal interstitium injury was seen in operated group and treated group at day 7，and became aggravating after day 7. The degree of renal tubulointerstitial fibrosis in rats from treated group was lighter than that of operated group at day 7， 14， 21(P

【Key words】 Silymarin tubulointerstitial fibrosis epithelial- mesenchymal transition transforming growth factor- beta1

腎小管上皮損傷引起小管上皮-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（EMT）在腎間質(zhì)纖維化進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。這個(gè)過(guò)程受許多因素影響，其發(fā)展機(jī)制涉及許多方面。近年來(lái)研究表明轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF -β1）在EMT進(jìn)程中具有重要的促進(jìn)作用[1]。本文旨在探討應(yīng)用水飛薊素能否防止腎小管間質(zhì)纖維化及可能機(jī)制?，F(xiàn)報(bào)道如下:

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物模型及分組

選用3月齡SD大鼠56只，體重200～250g，購(gòu)自新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心。大鼠適應(yīng)環(huán)境1周后，隨機(jī)分為：梗阻組（24只）、治療組（24只）、假手術(shù)組（8只）。大鼠行氯胺酮50mg/kg麻醉，取左旁正中切口剪開(kāi)腹壁，以4號(hào)手術(shù)線將左輸尿管近端兩處結(jié)扎。假手術(shù)組同樣處理但不結(jié)扎。其中治療組于術(shù)前30分鐘開(kāi)始給予水飛薊素30mg/kg灌胃，每日一次；假手術(shù)組和梗阻組給予等量生理鹽水灌胃處理。UUO大鼠于術(shù)后第7天、14天、21天隨機(jī)收獲8只，假手術(shù)組于第21天一次處死。取腎臟，10％多聚甲醛固定。光鏡下觀察腎組織的病理變化和免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腎臟TGF-β1及α-SMA的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中梗阻組第14天、21天時(shí)間點(diǎn)各死亡大鼠1只。

1.2 腎臟組織病理

腎組織切片進(jìn)行HE染色和Masson染色，光鏡下觀察。在IDA-2000高清晰度數(shù)碼纖維圖像分析系統(tǒng)下計(jì)算腎小管間質(zhì)纖維化相對(duì)面積。高倍鏡（×200）下每張切片隨機(jī)選取10個(gè)不重疊視野測(cè)定小管間質(zhì)纖維化面積與同視野小管間質(zhì)總面積的百分比，進(jìn)行半定量評(píng)分[2]，取其平均積分為每張切片評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分：無(wú)病變；1分：50％。

1.3 免疫組化

采用SABC法檢測(cè)腎組織中的TGF-β1和α-SMA，操作步驟按SABC試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。光鏡下組織切片呈棕黃色顆粒性沉積區(qū)域?yàn)殛?yáng)性染色部位。高倍鏡（×200）下在每張不包含腎小球和血管的腎小管間質(zhì)區(qū)域隨機(jī)選取10個(gè)不重疊的視野，應(yīng)用IDA-2000高清晰度數(shù)碼圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像采集，經(jīng)灰度變換將陽(yáng)性染色區(qū)域面積與該視野總面積百分比，計(jì)算平均值作為該樣本的百分比值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

各組數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（

）表達(dá)，組間差異采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)法。由SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 腎臟組織病理改變

光鏡下假手術(shù)組大鼠腎組織無(wú)病理改變。UUO術(shù)后梗阻組和治療組大鼠腎臟病理改變均明顯加重趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)第7天時(shí)，梗阻組和治療組大鼠腎間質(zhì)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、水腫，腎小管明顯擴(kuò)張，部分小管內(nèi)見(jiàn)大量細(xì)胞管型，腎小管上皮細(xì)胞胞漿疏松、濁腫和空泡變性。14天時(shí)，2組大鼠腎間質(zhì)彌漫性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，間質(zhì)面積進(jìn)一步增寬，腎小管明顯擴(kuò)張，部分小管內(nèi)仍見(jiàn)大量細(xì)胞管型，腎小管上皮細(xì)胞腫脹、空泡變性，間質(zhì)出現(xiàn)輕度纖維化。21天時(shí)，2組病變繼續(xù)加重，腎間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少，大部分腎小管脫落壞死、萎縮、消失，殘余腎小管明顯擴(kuò)張，上皮腫脹，空泡變性， 間質(zhì)纖維化明顯。治療組各觀察時(shí)間點(diǎn)腎臟病理變化明顯較梗阻組減輕（P

2.2 腎組織免疫組化變化

假手術(shù)組腎組織微量表達(dá)TGF-β1，主要位于腎小球系膜和上皮細(xì)胞，小管主要表達(dá)于遠(yuǎn)曲小管;梗阻組和治療組腎組織表達(dá)TGF-β1隨病情進(jìn)展而逐漸增強(qiáng)，遍布皮髄質(zhì)損傷的腎小管，除腎小管上皮細(xì)胞有陽(yáng)性表達(dá)外，增殖的單核巨噬細(xì)胞亦有表達(dá)。各觀察時(shí)間點(diǎn)治療組均較梗阻組減少(P

假手術(shù)組以血管作為自身陽(yáng)性內(nèi)參照，腎小球、腎小管和間質(zhì)細(xì)胞均未α-SMA表達(dá)。UUO大鼠術(shù)后第7天時(shí)腎間質(zhì)既有大量表達(dá)，14天時(shí)表達(dá)顯著增加，陽(yáng)性信號(hào)彌漫分布，高峰持續(xù)至21天實(shí)驗(yàn)結(jié)束。各觀察時(shí)間點(diǎn)治療組腎臟組織均較梗阻組減少(P

2.3 相關(guān)性分析 TGF-β1表達(dá)量與腎小管間質(zhì)損傷評(píng)分、α-SMA表達(dá)量均呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=0.914、0.971，P

3 討論

單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）誘導(dǎo)腎小管間質(zhì)纖維化模型主要造成腎小管損傷，伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并在較短時(shí)間內(nèi)發(fā)展為小管間質(zhì)纖維化，是目前研究腎小管間質(zhì)損傷較理想的模型之一[3]。本文采用UUO大鼠模型中的梗阻腎臟損害以小管間質(zhì)為主，伴有較多的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及進(jìn)行性纖維化，符合UUO模型的一般特點(diǎn)，表明動(dòng)物模型的構(gòu)建是成功的。

水飛薊素是從水飛薊植物提取的混合物，是一種黃酮醇類化合物，主要含水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊醇等。水飛薊素作為一種傳統(tǒng)藥物廣泛用于防治肝臟纖維化。它主要通過(guò)下調(diào)TGF-β1在肝內(nèi)的表達(dá)，改變肝枯否細(xì)胞的功能，抑制炎癥反應(yīng)，有效阻止肝纖維化[4]。目前研究發(fā)現(xiàn)腎小管間質(zhì)纖維化與肝纖維化的機(jī)制相同。那么，水飛薊素是否也能延緩腎小管間質(zhì)纖維化呢？本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：同梗阻組相比， 治療組各觀察時(shí)間點(diǎn)腎臟病理變化明顯減輕，腎小管間質(zhì)纖維化程度亦減輕。提示水飛薊素可有效減輕腎小管間質(zhì)纖維化。

腎小管間質(zhì)纖維化（TIF）幾乎是所有慢性腎臟疾病進(jìn)行性發(fā)展的共同通路，是導(dǎo)致終末期腎病(ESRD)的主要病理基礎(chǔ)[5]。腎小管間質(zhì)纖維化確切機(jī)制目前尚不清楚，其中一個(gè)重要機(jī)制就是肌成纖維細(xì)胞(Myof)增多及活化。Myof 是間質(zhì)中合成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的主要細(xì)胞，而細(xì)胞外基質(zhì)的增多直接導(dǎo)致了TIF的進(jìn)行性發(fā)展。目前Myof的來(lái)源還不完全明確，近年研究發(fā)現(xiàn)除了由成纖維細(xì)胞活化而來(lái)，還有相當(dāng)一部分來(lái)源于腎小管上皮細(xì)胞[6]，有學(xué)者報(bào)告在腎纖維化的發(fā)生過(guò)程中，36％的新增纖維細(xì)胞來(lái)源于腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化[7]。α-SMA是MyoF的重要標(biāo)志，可以用來(lái)觀測(cè)腎臟損傷時(shí)間質(zhì)纖維化的病理進(jìn)程[8]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，假手術(shù)組α-SMA僅表達(dá)于血管平滑肌肌層，UUO各組大鼠腎組織表達(dá)的α-SMA隨病情進(jìn)展而持續(xù)升高。梗阻組明顯高于治療組（P

參 考 文 獻(xiàn)

[1] Stahl PJ， Felsen D. Transforming growth factor-beta， basement membrane， and epithelial-mesenchymal transdifferentiation: implications for fibrosis in kidney disease. Am J Pathol ， 2001，159: 1187-92.

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[7] 李慧凜，周秋根，鄭法雷.腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的概念與病理過(guò)程。世界醫(yī)學(xué)雜志，2004，8（1）：34－35.

第2篇

1 非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)的作用及特點(diǎn)

(1) 提高了審計(jì)及時(shí)性。非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)借助計(jì)算機(jī)和網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，可以實(shí)時(shí)獲取業(yè)務(wù)系統(tǒng)有效的數(shù)據(jù)信息，通過(guò)設(shè)置預(yù)警標(biāo)準(zhǔn)能夠做到實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，實(shí)現(xiàn)對(duì)風(fēng)險(xiǎn)的早期控制，為管理層提供預(yù)警信號(hào)。為現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)提供資料和線索，最大限度地提高審計(jì)工作的效率和質(zhì)量，為領(lǐng)導(dǎo)決策提供支持。

(2) 拓寬了審計(jì)覆蓋面。建設(shè)銀行近年來(lái)資產(chǎn)規(guī)模增長(zhǎng)迅速，新的金融產(chǎn)品和服務(wù)不斷推出，業(yè)務(wù)的復(fù)雜程度大大提高，使審計(jì)的復(fù)雜程度也相應(yīng)提高，審覆蓋面廣度加大。在現(xiàn)有審計(jì)資源的條件下，單純依靠傳統(tǒng)的審計(jì)方式和手工作業(yè)模式難以保障審計(jì)監(jiān)督所必須達(dá)到的廣度和深度。而非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)依托高科技手段，可以遠(yuǎn)程調(diào)集所屬機(jī)構(gòu)的有關(guān)業(yè)務(wù)數(shù)據(jù)并進(jìn)行監(jiān)測(cè)，有助于全面把握分支機(jī)構(gòu)和各項(xiàng)業(yè)務(wù)的風(fēng)險(xiǎn)狀況。

(3) 降低審計(jì)成本，提高審計(jì)質(zhì)量和效率。一是節(jié)約審計(jì)成本。非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)模式下，審計(jì)組除了必要的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查和現(xiàn)場(chǎng)溝通外，可以大大減少審計(jì)人力費(fèi)用、差旅費(fèi)用和時(shí)間費(fèi)用。二是減少了調(diào)閱資料時(shí)間。非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)模式下，審計(jì)數(shù)據(jù)的采集主要通過(guò)固定的審計(jì)數(shù)據(jù)采集接口來(lái)獲得，避免了現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)中依賴被審計(jì)單位提供數(shù)據(jù)，使內(nèi)部審計(jì)具有前所未有的主動(dòng)性和靈活性。三是提高審計(jì)效率，增加審計(jì)價(jià)值。非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)是從定量分析到定性分析的過(guò)程，分析性復(fù)核方法貫穿于非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)的全過(guò)程，增強(qiáng)了審計(jì)人員的理性思維，可以避免重復(fù)勞動(dòng)和無(wú)效勞動(dòng)，規(guī)避審計(jì)風(fēng)險(xiǎn)，提高審計(jì)質(zhì)量，使現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)更具針對(duì)性，并且可以有效地解決審計(jì)資源不足與審計(jì)任務(wù)繁重的矛盾。

2 目前商業(yè)銀行開(kāi)展非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)存在的問(wèn)題

目前，商業(yè)銀行內(nèi)部審計(jì)方式仍然是以現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)為主，而非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)的手段沒(méi)有得到充分的發(fā)揮，不能滿足業(yè)務(wù)發(fā)展的需要。信息化、網(wǎng)絡(luò)化和專業(yè)技術(shù)化程度依然偏低，非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)發(fā)展存在一些薄弱環(huán)節(jié)，主要表現(xiàn)在：

(1) 未建立起一套科學(xué)、完整的非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)管理辦法和操作規(guī)程。進(jìn)一步推動(dòng)非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)工作尚未進(jìn)入系統(tǒng)性規(guī)劃階段，如在非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)發(fā)展推動(dòng)模式上缺少完整的規(guī)劃、目標(biāo)和具體措施；非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)推進(jìn)缺少組織保障，沒(méi)有明確的職責(zé)分工，缺少科學(xué)的領(lǐng)導(dǎo)、決策和協(xié)調(diào)；非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)的制度規(guī)章、操作流程尚屬空白。

(2) 熟悉非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)技術(shù)的人員嚴(yán)重不足，致使非現(xiàn)場(chǎng)技術(shù)應(yīng)用程度不高。非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)系統(tǒng)對(duì)使用人員的綜合素質(zhì)要求較高（操作處于半編程狀態(tài)），全面系統(tǒng)掌握非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)技術(shù)的人員匱乏，僅有少數(shù)審計(jì)人員熟悉數(shù)據(jù)源結(jié)構(gòu)，系統(tǒng)操作熟練，能夠編制審計(jì)模型，這些同志一般都有較深的技術(shù)背景（原科技人員）。大多數(shù)的審計(jì)專業(yè)人員尚不能熟練運(yùn)用非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)技術(shù)。非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)技術(shù)本應(yīng)是全體審計(jì)人員的必備工具，僅有少數(shù)人掌握，有違引進(jìn)非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)技術(shù)的初衷。

(3) 非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)僅作為現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)的輔助手段，仍然是在非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)分析初步篩選疑點(diǎn)的基礎(chǔ)上確定抽樣樣本后到現(xiàn)場(chǎng)查證確認(rèn)的模式。非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)技術(shù)應(yīng)用未能有效減少審計(jì)項(xiàng)目所需的審計(jì)資源量，同時(shí)，大量的現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)作業(yè)也勢(shì)必對(duì)業(yè)務(wù)經(jīng)營(yíng)造成不利的影響。

3 商業(yè)銀行如何有效拓展非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)的途徑

(1) 健全管理制度，落實(shí)發(fā)展目標(biāo)。提高認(rèn)識(shí)，落實(shí)發(fā)展目標(biāo)，制定整體規(guī)劃，建立健全非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)制度，保證非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)有章可循，保證數(shù)據(jù)的收集、加工、分析、報(bào)告和處理有條不紊，保證所有的現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)建立在非現(xiàn)場(chǎng)審計(jì)的基礎(chǔ)上。

第3篇

【摘要】 目的: 觀察Smad6和Smad7基因能否抑制TGFβ誘導(dǎo)腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化。方法: 構(gòu)建產(chǎn)生表達(dá)Smad6和Smad7基因的無(wú)輔毒腺相關(guān)病毒載體， 再將病毒顆粒分別轉(zhuǎn)染入人腎小管上皮細(xì)胞（HKC）， 細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照、 TGFβ1組、 Smad7 組、 LacZ組、 TGFβ1+Smad7或Smad6組、 TGFβ1＋LacZ組。10 μg/L TGFβ1添加入培養(yǎng)液孵育15、 30、 60、 120 min和3 d。Western blot測(cè)定TGFβ1和Smad6或Smad7基因轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞pSmad2、 Ecadherin、 αsmooth muscle actin（αSMA）表達(dá)的影響， ELISA法測(cè)定培養(yǎng)上清羥脯氨酸的含量的變化， 倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。結(jié)果: 與未加TGFβ1細(xì)胞相比， 添加TGFβ1后15、 30、 60、 120 min胞內(nèi)Smad2磷酸化水平明顯增加， 30 min時(shí)表現(xiàn)最大。10 μg/L TGFβ1與HKC孵育72 h后， 細(xì)胞αSMA和羥脯氨酸量合成增加， Ecadherin表達(dá)減少; 細(xì)胞形態(tài)變長(zhǎng)， 呈紡錘狀細(xì)胞， 失去鵝卵石樣的形狀。Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ1誘導(dǎo)Smad2磷酸化， 抑制細(xì)胞αSMA和羥脯氨酸合成， 增加Ecadherin表達(dá)， 維持培養(yǎng)細(xì)胞的上皮樣形態(tài)， 相反， Smad6沒(méi)有這樣的作用。結(jié)論: Smad7而不是Smad6基因轉(zhuǎn)染能抑制TGFβ1誘導(dǎo)腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化， 這些作用可能與Smad7阻斷Smad2磷酸化有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 Smad7; Smad6; 上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化; TGFβ; 基因治療

腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化（epithelial mesenchymal transition， EMT）是腎小管間質(zhì)纖維化(Tubulointerstitial fibrosis， TIF)發(fā)生的重要原因之一， 超過(guò)1/3的間質(zhì)成纖維細(xì)胞來(lái)源于EMT， 因此， 尋找減緩EMT的方法是TIF研究的重點(diǎn)［1， 2］。TGFβ是EMT的重要誘導(dǎo)劑之一， 減少其對(duì)小管上皮的影響可能對(duì)TIF治療有幫助。Smad6和Smad7蛋白是TGFβ家族細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)控蛋白（InhibitorySmads， ISmad）［3］。ISmads能與活化的TGFβⅠ型受體牢固結(jié)合， 阻止Smad2和Smad3磷酸化， 未磷酸化的Smad2和Smad3不能形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物進(jìn)入核內(nèi)， 從而阻斷了TGFβ對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)Smad6和Smad7表達(dá)下調(diào)可能是TGFβ 高表達(dá)致TIF的主要原因， 但提高它們的表達(dá)能否抑制TGFβ誘導(dǎo)的EMT尚不清楚［4］。為此， 我們采用腺相關(guān)病毒將Smad6和Smad7基因分別轉(zhuǎn)染入人腎小管細(xì)胞中， 觀察其能否抑制TGFβ誘導(dǎo)的EMT， 并分析其細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 材料 限制性核酸內(nèi)切酶BamH I、 Xho I及T4連接酶， 均購(gòu)自TaKaRa公司。Wizard PlusSV Minipreps DNA Purification System和Wizard PureFectionPlasmid DNA Purification System質(zhì)粒提取試劑盒和膠回收試劑盒， 均購(gòu)自Promega公司。TGFβ1和兔抗Flag M2抗體購(gòu)自Sigma公司， 兔抗phosphoSmad2抗體購(gòu)自u(píng)pstate biotechnology公司， 兔抗αSMA抗體購(gòu)自Dako公司， 兔抗Ecadherin抗體購(gòu)自B＆D公司。AAV HelperFree System（pAAVMCS vector、 pAAVLacZ vector、 pAAVRC plasmid、 pHelper plasmid）和XL10Gold感受態(tài)細(xì)菌， 購(gòu)自Stratagene公司。E.coli DH5α由本校分子遺傳教研室饋贈(zèng)。含全長(zhǎng)Smad6/Flag和Smad7/Flag融合基因表達(dá)質(zhì)粒， 由瑞典Serhiy Souchelnytskyi博士惠贈(zèng)。HEK 293和HKC細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)ATCC。

1.2 方法

1.2.1 Smad6和Smad7 AAV的產(chǎn)生及鑒定 首先將Smad6/Flag和Smad7/Fla段從質(zhì)粒pcDNA3中用EcoR I/BamH I雙酶切出， 再克隆到pAAVMCS vector質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)， 正式命名為pAAVSmad6/Flag和pAAVSmad7/Flag質(zhì)粒。按Stratagene公司AAV HelperFree System轉(zhuǎn)染試劑盒以磷酸鈣沉淀的方法產(chǎn)生Smad6和Smad7 AAV。以1 mL病毒儲(chǔ)存液感染HKC細(xì)胞48 h后表達(dá)轉(zhuǎn)移基因陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（SABC組化）來(lái)計(jì)算。

1.2.2 HKC細(xì)胞的培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組 HKC細(xì)胞用含100 mL/L的胎牛血清， 100 U/mL青霉素、 100 mg/L鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液傳代培養(yǎng)， 培養(yǎng)條件為37℃、 50 mL/L CO2。細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照、 TGFβ1組、 Smad7 組、 LacZ組、 TGFβ1+Smad7或Smad6組、 TGFβ1＋LacZ組。實(shí)驗(yàn)分三步驟進(jìn)行， 第一步觀察10 μg/L TGFβ1對(duì)HKC細(xì)胞磷酸化Smad2水平的影響， 時(shí)相點(diǎn)設(shè)為0、 15、 30、 60、 120 min; 第二步觀察不同AAV滴度ISmad轉(zhuǎn)染HKC對(duì)TGFβ1誘導(dǎo)上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響， 時(shí)相點(diǎn)為72 h。

1.2.3 Western bot 分析 細(xì)胞經(jīng)PBS沖洗后， 加入RIPA裂解液（10 g/L Nonidet P40， 50 mmol/L TrisHCl， 150 mmol/L NaCl， 2 mmol/L EDTA， 1 mL/L SDS， 10 mL/L TritonX100， PMSF 50 mg/L， Leuptin 5 mg/L）30 min勻漿提取蛋白， 4℃ 12 000 g離心20 min， 取上清以Micro BCA protein Kit 測(cè)定蛋白質(zhì)含量。取等量蛋白質(zhì)經(jīng)煮沸5 min后行SDSPAGE垂直凝膠電泳， 電轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)到PVDF膜上， 膜在50 mL/L牛血清白蛋白TBST液（10 mmol/L Tris·HCl， 150 mmol/L NaCI， 0.5 mL/L Tween20， pH8.0）封閉， 37℃室溫1 h， TBST洗膜后分別與不同一抗AntiphosphoSmad2（1∶1 000）、 Ecadherin（1∶1 000）， αsmooth muscle actin（1∶1 000）、 β actin（1∶1 000）抗體孵育37℃， 2 h， 依次再用生物素標(biāo)記的二抗雜交和辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素液孵育， 37℃， 1 h， TBST洗膜后在暗室中加ECL發(fā)光試劑， X光膠片下曝光， 常規(guī)方法顯影、 定影， 直至顯影出電泳帶。使用Bio Rad 5000圖像系統(tǒng)采集電泳圖像， Verso Doc軟件檢測(cè)蛋白質(zhì)條帶的吸光度（A）值， 以β actin為內(nèi)參照進(jìn)行半定量分析。

1.2.4 培養(yǎng)上清中羥脯氨酸的含量 嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)方法操作， 用M550型酶標(biāo)儀在550 nm處檢測(cè)A值， 通過(guò)下列公式計(jì)算樣品中羥脯氨酸含量。樣品中羥脯氨酸濃度(mg/L)=(測(cè)定管A值-空白管A值)/(標(biāo)準(zhǔn)管A值-空白管A值)。

1.2.5 培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化 觀察正常對(duì)照組， TGFβ1組， TGFβ1+Smad7組， TGFβ1+Smad7組細(xì)胞的形態(tài)變化。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示， 用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行組間方差分析， P

2 結(jié)果

2.1 重組AAV的產(chǎn)生及病毒滴度 分別取10 μg的質(zhì)粒pAAVLacZ或pAAVSmad6/Flag或pAAVSmad7/Flag和各10 μg的 pAAVRC和pHelper質(zhì)粒經(jīng)磷酸鈣沉淀法共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞后2～3 d。pAAVLacZ轉(zhuǎn)染組經(jīng)原位βGalactosidase 染色細(xì)胞后可見(jiàn)細(xì)胞呈藍(lán)色。轉(zhuǎn)染Smad6和Smad7 AAV的細(xì)胞， 約90％以上的腎小管上皮細(xì)胞可有效表達(dá)Smad6和Smad7蛋白， 染色后可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞呈棕色。平均病毒病毒滴度分別為rAAVlacZ 2×1010 IU/mL， pAAVSmad6/Flag 3×1010 IU/mL， pAAV Smad7/Flag 3×1010IU/mL（圖1）。

2.2 TGFβ1和ISmad基因轉(zhuǎn)染對(duì)pSmad2的表達(dá)的影響 Western blot結(jié)果顯示， HKC細(xì)胞和TGFβ1孵育0、 15、 30、 60、 120 min后， 細(xì)胞pSmad2水平增加， 其作用在30～60 min時(shí)表現(xiàn)最大， 表明TGFβ1可誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)Smad2磷酸化（圖2）。

1×1010滴度Smad7基因轉(zhuǎn)染HKC后30 min， Western blot結(jié)果顯示Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ1誘導(dǎo)的Smad2磷酸化水平， 而Smad6基因轉(zhuǎn)染不能抑制TGFβ1誘導(dǎo)的Smad2磷酸化（圖3、 4）。

2.3 ISmad基因轉(zhuǎn)染對(duì)TGFβ誘導(dǎo)腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響 Western結(jié)果顯示， 10 μg/L TGFβ1處理HKC細(xì)胞后72 h， 與正常對(duì)照組相比， 細(xì)胞αSMA表達(dá)增加， 而Ecadherin表達(dá)減少。與TGFβ1組相比， TGFβ1＋Smad7組細(xì)胞αSMA減少， Ecadherin表達(dá)明顯增加。TGFβ1＋Smad6組αSMA、 Ecadherin表達(dá)均無(wú)明顯變化， 表明Smad7基因轉(zhuǎn)染可拮抗TGFβ1誘導(dǎo)腎小管上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化， 而Smad6沒(méi)有這樣的作用(圖5～8)。

2.4 ISmad基因轉(zhuǎn)染對(duì)培養(yǎng)上清中羥脯氨酸的含量的影響 ELISA結(jié)果顯示， 10 μg/L TGFβ1處理HKC細(xì)胞后72 h， 與正常對(duì)照組（3.37±0.41)mg/L相比， 細(xì)胞培養(yǎng)上清中羥脯氨酸的含量（6.12±0.55) mg/L明顯增加。與TGFβ1組相比， TGFβ1＋Smad7組細(xì)胞上清羥脯氨酸的含量（4.15±0.46)mg/L明顯降低， 而Smad6組（6.15±0.56)mg/L無(wú)明顯變化， 表明Smad7基因轉(zhuǎn)染可拮抗TGFβ1誘導(dǎo)腎小管羥脯氨酸的合成， 而Smad6沒(méi)有這樣的作用。

2.5 培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化 10 μg/L TGFβ1作用72 h后細(xì)胞形態(tài)變長(zhǎng)， 呈紡錘狀細(xì)胞， 失去鵝卵石樣的形狀， 表明腎小管細(xì)胞向肌纖維細(xì)胞形狀轉(zhuǎn)變。與TGFβ1組相比， TGFβ1＋Smad7組細(xì)胞能維持上皮樣形態(tài)， 而TGFβ1＋Smad6組細(xì)胞不能維持上皮樣形態(tài)， 呈紡錘狀細(xì)胞(圖9)。

3 討論

TIF是各種腎臟疾病進(jìn)展至腎衰竭的共同通路， 減緩TIF的進(jìn)展一直是慢性腎病治療的重點(diǎn)之一［5］。TIF主要表現(xiàn)為小管細(xì)胞消失和間質(zhì)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的堆積。ECM主要由纖維連接蛋白和膠原蛋白組成。盡管腎小管細(xì)胞能合成部分ECM， 但肌成纖維細(xì)胞是ECM的主要來(lái)源。研究表明， 肌成纖維細(xì)胞的來(lái)源可能有: ①腎間質(zhì)固有成纖維細(xì)胞; ②腎髓源性干細(xì)胞; ③EMT， 其中EMT是腎臟纖維化中肌成纖維細(xì)胞的主要來(lái)源， Iwano等［2］報(bào)道大約36％的肌成纖維細(xì)胞來(lái)源于腎臟局部EMT。因此， 探討EMT成因和阻斷措施對(duì)減緩TIF的進(jìn)展具有重要意義。本研究結(jié)果顯示， HKC細(xì)胞和TGFβ1孵育0、 15、 30、 60、 120 min后， 細(xì)胞pSmad2水平增加， 說(shuō)明TGFβ通過(guò)Smad2的磷酸化實(shí)現(xiàn)其胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。Smads蛋白是TGFβ細(xì)胞內(nèi)的主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白， TGFβ首先與其II型受體結(jié)合， 活化的II型受體蛋白激酶使I型受體磷酸化， 活化的I型受體蛋白激酶作用于Rsmads(Smad2， 3)， 使其磷酸化， 隨后Smad2， 3與4形成異源寡聚體復(fù)合物， 移入核內(nèi)， 在核內(nèi)其與目的基因啟動(dòng)子區(qū)的Smads反應(yīng)元件結(jié)合， 啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄， 包括膠原基因、 ISmad基因等。Ellis等［6］發(fā)現(xiàn)I， III 和V膠原基因均含有Smad2， 3， 4的結(jié)合位點(diǎn)。PAI1基因啟動(dòng)子740和647位點(diǎn)存在有TGFβ反應(yīng)元件， 活化的Smad形成的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物與此元件結(jié)合后， 可增強(qiáng)PAI1基因的轉(zhuǎn)錄［7］， 由此影響纖溶酶原/纖溶酶的活性。Hu等［8］還證實(shí)alphaSMA基因的啟動(dòng)子中含有二個(gè)Smad3反應(yīng)區(qū)， Smad3可促進(jìn)αSMA的表達(dá)， 因此阻抑受體活化的Smad(Smad2， 3)磷酸化， 是減弱TGFβ信號(hào)， 控制EMT的關(guān)鍵。Smad6和Smad7蛋白是TGFβ家族細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的負(fù)調(diào)控蛋白。TGFβ活化I型受體同時(shí)也激活I(lǐng)Smad， Smad7通過(guò)與Smad2和Smad3競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合I型受體， 抑制其磷酸化并干預(yù)核內(nèi)功能性SmadDNA的形成［9］; 另一方面Smad7還可與smurfl/2結(jié)合， 通過(guò)泛素化途徑降解I型受體， 對(duì)TGFβ細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行負(fù)反饋調(diào)節(jié)［10］。Smad6主要負(fù)調(diào)控蛋白骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP）和部分TGFβ的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)［11］。既往我們建立單側(cè)輸尿管梗阻性腎病腎小管間質(zhì)纖維化模型， 發(fā)現(xiàn)Smad6和Smad7表達(dá)下調(diào)可能是TGFβ 高表達(dá)致TIF的主要原因， 但提高它們的表達(dá)能否抑制TGFβ誘導(dǎo)的EMT尚不清楚。本研究結(jié)果顯示， Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ1誘導(dǎo)Smad2磷酸化， 而Smad6基因轉(zhuǎn)染不能抑制TGFβ1誘導(dǎo)的Smad2磷酸化， 說(shuō)明Smad2磷酸化只受Smad7調(diào)控。Smad6不具有這樣的作用， 我們分析這可能與Smad6主要影響Smad1和Smad5的磷酸化［12］， 參與調(diào)控BMP信號(hào)通路作用有關(guān)。Zhao等［13］發(fā)現(xiàn)Smad7而不是Smad6可抑制TGFβ誘導(dǎo)的胚胎肺的形態(tài)發(fā)生; HillKapturczak等［14］還證實(shí)Smad7而不是Smad6可抑制TGFβ對(duì)腎小管細(xì)胞血紅素加氧酶的抑制．因此， 控制Smad2的活化可能是Smad7減弱TGFβ信號(hào)的分子機(jī)制基礎(chǔ)。

從ECM產(chǎn)生這個(gè)角度來(lái)看， 激活產(chǎn)生ECM的效應(yīng)細(xì)胞被認(rèn)為是腎臟纖維化的核心。研究已經(jīng)揭示肌成纖維細(xì)胞是ECM的主要來(lái)源， 腎臟纖維化中肌成纖維細(xì)胞的主要來(lái)源于EMT［2， 5］。腎小管發(fā)生EMT時(shí)主要表現(xiàn)以下特點(diǎn): ①細(xì)胞極性消失; ②細(xì)胞Ecadherin表達(dá)受抑制和緊密連接消失; ③表達(dá)波形纖維蛋白; ④表達(dá)αSMA。其中Ecadherin是上皮細(xì)胞的標(biāo)記分子， 對(duì)維持上皮細(xì)胞間緊密連接， 穩(wěn)定上皮細(xì)胞表型具有重要的作用， αSMA是MFB的標(biāo)記分子［15］。倒置顯微鏡觀察10 μg/L TGFβ1作用72 h后細(xì)胞形態(tài)變長(zhǎng)， 呈紡錘狀細(xì)胞， 失去鵝卵石樣的形狀， 表明腎小管細(xì)胞向纖維細(xì)胞形狀轉(zhuǎn)變。Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ1誘導(dǎo)的Ecadherin表達(dá)下降和αSMA表達(dá)增加， 降低培養(yǎng)上清中羥脯氨酸的含量， HKC能維持上皮樣形態(tài)， 向纖維細(xì)胞形狀轉(zhuǎn)變不明顯， 而Smad6轉(zhuǎn)染組不具有這樣的作用， 說(shuō)明Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化， 從而減少肌成纖維細(xì)胞的數(shù)目， 最終減輕腎小管間質(zhì)纖維化。

總之， Smad7基因轉(zhuǎn)染可抑制TGFβ誘導(dǎo)的腎小管細(xì)胞上皮－間充質(zhì)的轉(zhuǎn)分化， 其作用途徑可能是通過(guò)抑制Smad2磷酸化， 干預(yù)下游Smad介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)， 維持Ecadherin表達(dá)， 減少αSMA表達(dá)， 降低細(xì)胞合成ECM蛋白有關(guān)， 而Smad6基因轉(zhuǎn)染不具有這樣的作用。

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第4篇

身高：160cm

之前體重：112斤

目前體重：98斤

減重歷時(shí)：30天

馬拉松式的8年戀愛(ài)終于有了功德圓滿的結(jié)果：2007年10月5號(hào)，我，不漂亮也不難看的傻女孩Elle就要嫁給馬志剛了！

從確定婚期那天開(kāi)始，我便緊繃神經(jīng)，全力以赴地應(yīng)對(duì)婚期的大小瑣事，布置新房、挑選禮服與喜帖……忙得不亦樂(lè)乎。

還記得那天和志剛?cè)ピ嚩Y服，我相中了一件魚(yú)尾式白色紗裙，穿上后在鏡子前左右環(huán)顧，鏡中的自己仿若童話中美麗的人魚(yú)公主?；仡^期待地看向志剛，等待著他的贊美?！班?，好看！”我的心有點(diǎn)飄飄然，但誰(shuí)知他又補(bǔ)了一句：“不過(guò)，要是能再瘦點(diǎn)就好了?！绷r(shí)，我沮喪到極點(diǎn)。我知道志剛這么說(shuō)是無(wú)意的，但還是深深地刺痛了我，從那一刻開(kāi)始我痛下決心，一定要在婚前減掉身上多余的肉肉，讓穿上漂亮婚紗的自己成為志剛最引以為豪的美麗新娘。

8月26日，我開(kāi)始了自己的目標(biāo)型減肥計(jì)劃。

離婚期還有近10天，我的減肥計(jì)劃正好滿一個(gè)月，站在體重稱上看著指針?lè)€(wěn)穩(wěn)地停在49kg處，我的欣喜難以言表，一個(gè)月來(lái)減肥的辛苦與忍耐都在這一刻化為烏有，我甚至能夠想象得出，在甩掉了身上足足14斤贅肉之后，再穿上那件漂亮的魚(yú)尾式婚紗的自己會(huì)是多么的婀娜。

幸福是要與朋友一起分享的，因此，我首先想到與我一樣艱難行走在減肥路上的姐妹。我要將自己成功減肥的心得告訴她們，讓她們也能和我一樣實(shí)現(xiàn)瘦身夢(mèng)想。

總結(jié)這一個(gè)月的減肥經(jīng)歷，我覺(jué)得有3點(diǎn)至關(guān)重要，有興趣就聽(tīng)我慢慢說(shuō)吧。

減肥關(guān)鍵1：飲食――少食多餐，均衡飲食

我曾經(jīng)有過(guò)幾次減肥經(jīng)歷，其中也有靠節(jié)食的，但由于克制力不夠，雖然體重有所減少，但很不穩(wěn)定，多吃一點(diǎn)就會(huì)反彈；而且那段時(shí)間的體質(zhì)很不好，臉色暗黃暗黃的，給人一副病怏怏的感覺(jué)。

減肥就是為了美，如果為“纖瘦美”而丟了“健康美”，豈不和扳苞谷的猴子沒(méi)什么兩樣？這樣一想，我便決定放棄。不過(guò)，那次經(jīng)歷給了我一些提醒，讓我在開(kāi)始這次減肥之前就對(duì)自己的飲食做了調(diào)整。

清晨：空腹喝一杯白開(kāi)水或清水。

早餐：中式早餐以營(yíng)養(yǎng)的湯、米飯、青菜為主，外加雞肉或魚(yú)肉；西式的則以全麥面包、脫脂牛奶、煎蛋（但不放鹽）為主，配以蘋(píng)果或西紅柿等。如此豐盛卻完全不用擔(dān)心致胖，唯一需注意的就是要保證一次食量不能太多，以免把胃撐大。

加餐：一般在10～11點(diǎn)之間，主要是吃水果，比如1個(gè)蘋(píng)果或桃子、香蕉等。我個(gè)人認(rèn)為減肥期間營(yíng)養(yǎng)一定要均衡，而且上午吃東西，身體吸收和消化能力都很強(qiáng)，新陳代謝速度快，不會(huì)囤積脂肪。

午餐：米飯和青菜。保持健康原則，吃飽但絕不吃撐。若在飯前半小時(shí)喝1大杯白開(kāi)水，可避免午餐吃過(guò)量。

下午茶：一般1點(diǎn)上班時(shí)我會(huì)喝1杯濃濃的普洱茶，去脂兼提神；3點(diǎn)時(shí)我會(huì)喝1杯酸奶，健康養(yǎng)顏且利于消化，是不可或缺的下午茶；考慮到減肥的同時(shí)很可能會(huì)讓胸部也縮水，因此每天下午我還會(huì)喝1杯木瓜飲料，具體喝的時(shí)間不固定，但一定要在5點(diǎn)之前，以免多余熱量無(wú)法及時(shí)得到消耗。

晚餐：我一般很少吃。但如果要去健身，去之前我會(huì)喝1杯酸奶，再吃1個(gè)西紅柿或1根黃瓜，回來(lái)后我則會(huì)喝一些清淡的蔬菜湯。其實(shí)，晚餐的原則就是――吃得越早、越少會(huì)越好。謹(jǐn)記這一原則，并盡力遵守，你就會(huì)看到回報(bào)。

Point：想健康就要多喝水，但這一理論只適合白天。把人體1天所需的2～3升水全放在白天攝入，晚上8點(diǎn)之后就盡量不要喝水，要知道晚上喝太多水會(huì)導(dǎo)致身體浮腫，從而影響減重效果。

減肥關(guān)鍵2：運(yùn)動(dòng)――堅(jiān)持就是勝利

我選擇去健身房做專業(yè)且有針對(duì)性的運(yùn)動(dòng)，以充分鍛煉全身每一個(gè)部位，如此瘦下來(lái)會(huì)比較均勻、有型。此外，健身房充滿激情的群體運(yùn)動(dòng)氛圍，能充分帶動(dòng)人的運(yùn)動(dòng)興致，令人很輕松地燃燒掉更多脂肪。

狠下心花錢(qián)――

我先在一家條件不錯(cuò)的健身中心辦了張年卡，費(fèi)用總計(jì)4800元，之后又給自己買了套將近1000元的健身服，總計(jì)差不多是我年收入的1/10，對(duì)我來(lái)說(shuō)算是大出血了，這么做只是希望代價(jià)不菲的健身卡和健身服能督促我堅(jiān)持運(yùn)動(dòng)。聽(tīng)朋友說(shuō)，在昂貴的運(yùn)動(dòng)場(chǎng)所若自己不能堅(jiān)持就會(huì)為花掉的錢(qián)倍感心疼，以此來(lái)達(dá)到運(yùn)動(dòng)目的。聽(tīng)說(shuō)這種方法百試不爽，再懶的女生都會(huì)堅(jiān)持，總之我自己就是因心疼花掉的錢(qián)才堅(jiān)持下來(lái)的，哈哈。

健身房甩脂先苦后甜――

每周我會(huì)去健身房3次，以快走和器械練習(xí)為主。

快走：我個(gè)人認(rèn)為它是一項(xiàng)非常好且容易堅(jiān)持下來(lái)運(yùn)動(dòng)。如果換成跑步，對(duì)我來(lái)說(shuō)就有些難度，而且像跑步這種過(guò)于激烈的運(yùn)動(dòng)若一次持續(xù)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間，會(huì)對(duì)膝關(guān)節(jié)和腳踝造成強(qiáng)烈的沖擊。

每次快走我會(huì)堅(jiān)持60～75分鐘，而為加大運(yùn)動(dòng)量以及增添樂(lè)趣，我會(huì)選擇性地變換快走節(jié)奏，前10～15分鐘以5公里/小時(shí)的速度走，接下來(lái)的15～20分鐘以6公里/小時(shí)的速度走，之后的20～30分鐘以6.5～7公里/小時(shí)的速度走，最后的10～15分鐘步率逐漸降低，以約4.5公里/小時(shí)的速度走，這樣有急有緩，運(yùn)動(dòng)起來(lái)不會(huì)覺(jué)得太累。此外，如果你喜歡跳舞，快走時(shí)還可踩著健身房里舞曲的鼓點(diǎn)，優(yōu)美的身姿可會(huì)為你贏來(lái)不少帥哥的矚目。

器械練習(xí)：這種練習(xí)主要是針對(duì)手臂、腹部、腿部和臀部等重點(diǎn)部位，相對(duì)來(lái)說(shuō)比較專業(yè)，運(yùn)動(dòng)時(shí)最好請(qǐng)健身教練有指對(duì)性地為你設(shè)計(jì)最佳的練習(xí)方式。我個(gè)人感覺(jué)，器械練習(xí)重量越輕越好，只要做的次數(shù)多一些就可以了。

跳操：這其實(shí)是最適合女性減肥的好運(yùn)動(dòng)，不過(guò)由于我去的那家健身房跳操班的人實(shí)在太多，我又天生不愛(ài)湊熱鬧，便只好放棄。

Point：不管選擇什么運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目，最后都要做足拉伸運(yùn)動(dòng)，再做一定時(shí)間的按摩，尤其是腿部，它能幫助你保持優(yōu)美的身體線條。

減肥關(guān)鍵3：心態(tài)――減肥是生活中最自然的一部分

“胖”不僅意味著體內(nèi)污物排出不徹底、新陳代謝緩慢，同時(shí)還會(huì)給人以倦怠不精神的印象。年輕的身體應(yīng)該是健康且充滿活力的，因此，選擇減肥不僅是一種積極面對(duì)生活的態(tài)度，更是追求健康與青春的本能需要。它不是否定原來(lái)的自己，而是要讓原來(lái)的自己更加完美。

第5篇

1、堅(jiān)持跑步。由于飲食不規(guī)律，導(dǎo)致身體長(zhǎng)胖，想快速減肥。最簡(jiǎn)單也是最方便的一個(gè)方法就是跑步，由于每個(gè)人的身體體質(zhì)不同，可以選擇慢跑，也可以選擇慢走，快走，總之需要意志堅(jiān)定，每天去堅(jiān)持，就會(huì)有很明顯的效果。

2、每天堅(jiān)持做仰臥起坐。減肥，是一個(gè)很漫長(zhǎng)的事，其實(shí)也是一步一步的發(fā)展的，需要人去堅(jiān)持，才會(huì)有效果。仰臥起坐是最常見(jiàn)的一種鍛煉方式，簡(jiǎn)單有效。我們可以早上起來(lái)，或者睡前，飯后一小時(shí)，堅(jiān)持做上幾組仰臥起坐，每天能堅(jiān)持養(yǎng)成鍛煉的好習(xí)慣，減肥就不是難事了。

3、堅(jiān)持去健身房。相比較很多散練的運(yùn)動(dòng)減肥方法，可能效果不太明顯，這時(shí)候如果有一定的條件的話，可以選擇去專業(yè)的健身房，哪里有專業(yè)的器材，還有專業(yè)的教練，對(duì)于你個(gè)人的減肥，可以給出很好的計(jì)劃，能讓你快速減肥，達(dá)到好的效果。

4、堅(jiān)持做平板支撐。減肥的方法有很多種，除了仰臥起坐，俯臥撐，平板支撐也是最常見(jiàn)的一種鍛煉方法，無(wú)需借助其他器材，只需要瑜伽墊，簡(jiǎn)單方便。剛開(kāi)始可以設(shè)定短一點(diǎn)的時(shí)間，后來(lái)可以慢慢加長(zhǎng)訓(xùn)練的時(shí)間，不斷地鍛煉自己，堅(jiān)持下去，對(duì)減肥一定會(huì)有效果。

（來(lái)源：文章屋網(wǎng) ）

第6篇

第1招：像寶寶一樣愛(ài)玩

寶寶們都喜歡在床上、地板上爬著到處轉(zhuǎn)，當(dāng)他們爬行時(shí)，他們的腹部和背部肌肉在用勁，這些核心肌肉對(duì)干訓(xùn)練他們爬行和坐立是非常重要的。媽媽們也要將注意力集中在這些肌肉上。 “訓(xùn)練核心肌肉非常重要，但就像做伸展運(yùn)動(dòng)一樣。盡管效果不是十分明顯，但不要因?yàn)檫@樣就忽視它，強(qiáng)壯的核心肌肉可以讓你在日?；顒?dòng)中擁有更好的控制力和輔助力?！报D位健身房高級(jí)私人教練這樣說(shuō)。

這樣做同樣會(huì)使你變得更強(qiáng)壯，以便能參加更多的運(yùn)動(dòng)。寶寶在玩耍的時(shí)候，媽媽可以學(xué)著跟寶寶一起運(yùn)動(dòng)，跟寶寶一起玩捉迷藏，也可以自己做些簡(jiǎn)單的健身操、瑜伽操等等。

第2招：像寶寶一樣吃

說(shuō)到和寶寶一樣吃，我們大多數(shù)成人也許會(huì)不以為然，腦海里浮現(xiàn)的是寶寶吃東西時(shí)在頭發(fā)或者臉上都沾滿食物的畫(huà)面。實(shí)際上，像寶寶一樣吃飯也是減肥的重要因素。

①像寶寶一樣每隔3―4小時(shí)吃點(diǎn)小點(diǎn)心，可以使你保持充足的精力。美國(guó)體育醫(yī)學(xué)院的學(xué)者發(fā)現(xiàn)整天都在攝入食物的運(yùn)動(dòng)員的脂肪比那些在正統(tǒng)吃飯時(shí)間消耗他們所有卡路里的人更少。

②像寶寶一樣在飽了以后就停止進(jìn)食，不管你面前還留對(duì)于小媽們來(lái)說(shuō)，有什么比小寶寶胖乎乎的小臉蛋和肉嘟嘟的小胳膊小腿更讓人喜歡的呢!然而，對(duì)于自己身上的贅肉，媽媽們卻苦惱不已。兒科醫(yī)生說(shuō)：寶寶開(kāi)始學(xué)會(huì)爬行時(shí)，它的嬰兒肥就開(kāi)始慢慢減少了。那么，他們的媽媽呢?因?yàn)閼言猩a(chǎn)而增力0的體重也會(huì)慢慢自然減少嗎?――答案是否定的。但，也許我們也可以從寶寶身上學(xué)幾招減肥秘技：著多少美食――這對(duì)于控制食量是非常值得借鑒的。

③像寶寶一樣選擇多樣化的食物。在你的食物里加入給寶寶吃的食物，比如說(shuō)南瓜、青豆、牛肉、米飯、香蕉和梨等等。參與選擇寶寶食譜意味著你攝入了更多的水果和蔬菜，飲食也變得更健康。

第3招：像寶寶一樣睡

寶寶的睡眠時(shí)間大約在12-15個(gè)小時(shí)，這個(gè)時(shí)間對(duì)于我們成人來(lái)說(shuō)是非常奢侈的。在你的減肥計(jì)劃中，充足的睡眠往往可能是被忽略的環(huán)節(jié)。最近的研究顯示：缺乏睡眠會(huì)影響人體的荷爾蒙水平，從而增加人體的饑餓感并減慢新陳代謝速度。所以，在你累了或者困了的時(shí)候，適當(dāng)?shù)男菹⑹欠浅Ｃ髦堑倪x擇。

第4招：像寶寶一樣看電視

電視真的對(duì)你的寶寶有好處嗎?醫(yī)學(xué)研究表明：長(zhǎng)時(shí)間看電視的寶寶可能導(dǎo)致體質(zhì)指數(shù)增高。那么，對(duì)于喜愛(ài)看電視的媽媽來(lái)說(shuō)，這又意味著什么呢?醫(yī)學(xué)研究者最近發(fā)現(xiàn)：看電視的時(shí)候，一個(gè)人的新陳代謝實(shí)際上比他在休息的時(shí)候要慢。那就意味著你睡覺(jué)時(shí)比你早起看早間節(jié)目能燃燒更多的卡路里。美國(guó)育兒專家建議寶寶的前兩年時(shí)間里最好沒(méi)有電視。也許媽媽也應(yīng)該如此。

如果你已經(jīng)打開(kāi)了電視，那么轉(zhuǎn)個(gè)頭，看看你的寶寶，他是如何看電視的。寶寶在看有強(qiáng)節(jié)奏感音樂(lè)伴奏的節(jié)目時(shí)，會(huì)拍手、蹦跳或者跳舞。換句話說(shuō)，看電視并不是讓你自己懶洋洋地窩在沙發(fā)里或者床上，而是把電視當(dāng)作你保持運(yùn)動(dòng)的一種背景，你可以在家里的地板上散步，可以舉舉啞鈴或者做回你的老本行――家務(wù)活。

第5招：像寶寶一樣喝牛奶

寶寶最喜歡白色飲料了，不管它是配方奶粉、牛奶或者是來(lái)自媽媽的母乳，奶類食品可以給寶寶提供充足的鈣。同樣，媽媽每天也需要補(bǔ)充一定量的鈣，尤其是還處在哺乳期的媽媽。但是，媽媽們還是心存疑慮：奶制品能減肥嗎?答案是肯定的。

最近的研究已經(jīng)顯示：含鈣量豐富的奶制品可以增強(qiáng)機(jī)體燃燒脂肪的能力，并加快新陳代謝。美國(guó)田納西州大學(xué)教授MICHAELB．ZEMEL博士研究發(fā)現(xiàn)：富含奶制品的飲食習(xí)慣，再加上適當(dāng)?shù)倪\(yùn)動(dòng)，可以加快減少體重的過(guò)程。ZEMEL博士的其中一項(xiàng)研究表明：經(jīng)常食用低脂酸奶的人腹部減少的體重是不食用酸奶的人的3倍。

奶制品能減少腹部脂肪的確切原因仍待考證，但ZEMEL博士相信當(dāng)人體攝入奶制品時(shí)，必定會(huì)發(fā)生某種荷爾蒙反應(yīng)，導(dǎo)致腹部的脂肪細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。所以，專家建議：當(dāng)媽媽們一方面擔(dān)心她們的飲食習(xí)慣是否健康，另一方面又擔(dān)心她們的形體，她們要做的第一件事就是開(kāi)始每天喝牛奶。

第6招：像寶寶一枯多多運(yùn)動(dòng)

盡管寶寶可能只有你膝蓋那么點(diǎn)高，但他們會(huì)有某些激烈運(yùn)動(dòng)，也就是說(shuō)經(jīng)常會(huì)有短時(shí)期的能量暴發(fā)，這對(duì)手媽媽的減肥計(jì)劃也有益處。研究表明短時(shí)間的激烈運(yùn)動(dòng)的效果和在健身房里泡上兩個(gè)小時(shí)的作用是一樣的。只要你的心跳達(dá)到每分鐘40－60下，就意味著你身體的脂肪在燃燒了。除此之外，即使你結(jié)束了某種激烈運(yùn)動(dòng)，你的身體也會(huì)繼續(xù)燃燒脂肪，這種現(xiàn)象我們稱之為后燃燒。

所以，媽媽們，每天都嘗試一種新的運(yùn)動(dòng)吧。去健身房的時(shí)候，可以不斷地更換你參力口的項(xiàng)目，從器械到健身操，從健身操到芭蕾，再?gòu)陌爬傥杌氐狡餍颠\(yùn)動(dòng)，如此不斷的循環(huán)往復(fù)。當(dāng)然，運(yùn)動(dòng)不僅僅只局限在健身房，帶上你的寶寶，推個(gè)小車逛超市、商場(chǎng)，空的時(shí)候自己跳躍幾下都是健康且經(jīng)濟(jì)的選擇。

第7篇

一份新出爐的減重調(diào)查報(bào)告發(fā)現(xiàn)，81％的男性受訪者自覺(jué)減重有助體能表現(xiàn)，其中更有半數(shù)以上認(rèn)為有助提高次數(shù)與腰肌力量。 女性受訪者則有72％認(rèn)為減肥有助外在魅力，四成三表示有助次數(shù)、三成覺(jué)得有助。

一天當(dāng)中，有N個(gè)會(huì)要開(kāi)，哪里有時(shí)間安靜下來(lái)享受美味。

一般中午的時(shí)候，我都會(huì)在麥當(dāng)勞、肯德基買個(gè)漢堡充饑。晚上，下班都很晚，路上包里隨時(shí)準(zhǔn)備的小零食已經(jīng)把我喂個(gè)半飽?；氐郊遥S盛的晚餐讓我食欲大開(kāi)。這些天，我發(fā)現(xiàn)我的體重明顯上漲了，腰部贅肉已經(jīng)現(xiàn)身了。我是該減肥了。

老公：任珂29歲部門(mén)主管老婆差不多，早餐對(duì)我來(lái)說(shuō)就是一大杯果汁和一杯黑咖啡就OK了。辦公室的抽屜里的糖，餅干隨時(shí)防止肚子唱空城計(jì)。純凈水是我平時(shí)主要的飲料。

中午，我?guī)缀醵际窃趯?xiě)字樓下的餐廳吃點(diǎn)快餐，無(wú)非都是米飯炒菜之類的東西，比較油膩。

由于老婆下班比較晚，為了等她共進(jìn)晚餐，我通常在晚飯前會(huì)先吃點(diǎn)餅干或火腿腸，再喝點(diǎn)威士忌，以撫慰我的“五臟廟”。我們的晚餐是比較豐盛的，都是我們愛(ài)吃的紅燒排骨、水煮牛肉之類的菜。飯后，我倆還會(huì)邊看電視，邊吃點(diǎn)小零食。

常會(huì)喝一杯鮮果汁或者豆?jié){

由于中午時(shí)間比較緊張，午餐基本都是在飯館吃。那里的飯菜比較油膩，好像都是從油里泡出來(lái)似的。盡管我知道這對(duì)減肥很不利，可美味的誘惑實(shí)在太大了。我很喜歡吃水果，也喜歡吃零食，餅干、蜜餞、薯片……來(lái)者不拒。

我們倆決定一起減肥。等到目標(biāo)一達(dá)成，我的第一件事，就是把不敢穿的緊身衣服一次買齊，出門(mén)秀身材。

這已經(jīng)養(yǎng)成習(xí)慣了。

中午，會(huì)去同一家餐館用餐，吃一些蔬菜、肉類搭配均勻的工作餐。我不太喜歡吃水果。為了自己的健康，我打算減重5公斤。

雙人健身一起變瘦

兩個(gè)人一起健身，給你帶來(lái)的收獲遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出你的想象!

首先，兩個(gè)愛(ài)侶一起瘦身會(huì)讓減肥不再是難以堅(jiān)持的苦差事。兩個(gè)人可以相互鼓勵(lì)，相互督促，一方泄氣了，動(dòng)搖了，另一方可以在一旁幫忙打氣。其次，有個(gè)人在旁邊看著，你的錯(cuò)誤動(dòng)作就會(huì)無(wú)處藏身，避免了很多“無(wú)用功”。兩人瘦身成功后，上街時(shí)的那份良好感覺(jué)是不言而喻的。減肥也和休閑一樣，兩個(gè)人總比一個(gè)人樂(lè)趣多。

第8篇

3年前，在一個(gè)朋友的鼓勵(lì)下，Natalie 走進(jìn)了當(dāng)?shù)氐慕∩矸俊Ｔ诿绹?guó)康乃狄克州斯坦福德的Sportsplex健身俱樂(lè)部，她報(bào)名參加了超級(jí)減肥項(xiàng)目，這是一個(gè)8周的密集減肥計(jì)劃，它包含為會(huì)員尋求甩掉贅肉的健康和營(yíng)養(yǎng)方面的咨詢。

Gianesello說(shuō)：“我很擔(dān)憂，自己并不是一個(gè)積極主動(dòng)的人，更不是那種一下班就會(huì)去健身房的人?！彪m然對(duì)她來(lái)說(shuō)健身俱樂(lè)部中很多事物都是新鮮的，但Gianesello很快就適應(yīng)了。“在那樣的環(huán)境中，與志同道合的人一起運(yùn)動(dòng)，我感到很舒服，”經(jīng)過(guò)8周的超級(jí)減肥項(xiàng)目，她減掉了約14鎊，并在項(xiàng)目結(jié)束后向更高的目標(biāo)前進(jìn)——首先聘請(qǐng)私人教練為她定制一個(gè)健康規(guī)劃，然后報(bào)一個(gè)訓(xùn)練營(yíng)課程并在幾周內(nèi)的工作之余完成它?！白罱K，我從169鎊減到129鎊，”Gianesello說(shuō)道，“這不僅僅只是數(shù)字問(wèn)題，我已經(jīng)迷上了健身！”

興趣的吸引力

雖然成功減重，但是Gianesello對(duì)運(yùn)動(dòng)的熱誠(chéng)并沒(méi)有減少。她的教練提醒她，個(gè)性能幫助她更快更好的成為一個(gè)健美教練?！拔曳浅８屑に倪@番話，但我認(rèn)為他只是在說(shuō)笑而已?！彼f(shuō)道，“經(jīng)過(guò)另外幾次訓(xùn)練后，他讓我去教班上的一個(gè)學(xué)生。然而我發(fā)現(xiàn)他是對(duì)的：我喜歡當(dāng)教練。”Gianesello開(kāi)始為取得證書(shū)而奮斗。在此過(guò)程中，她學(xué)習(xí)了如何幫助別人保持健康這類非常寶貴的課程。她說(shuō)道，“我曾經(jīng)逃避參加那些集體健身課程，一走進(jìn)教室，站在那些如電影中走出來(lái)的苗條女人旁邊，使我完全失去了自信心?！?/p>

正在她努力將自己的體形變得更完美時(shí)，她突然醒悟：“我意識(shí)到無(wú)論她們的體形如何，在上課時(shí)她們的注意力都完全集中在自己身上，這使我減少了很多壓力?！盙ianesello也了解到緩慢而穩(wěn)定的運(yùn)動(dòng)效果更佳。那些保持健身的人比剛剛開(kāi)始的人更強(qiáng)壯，但這需要你投入時(shí)間，日復(fù)一日的練習(xí)，無(wú)論你的技巧是否純熟，都能獲得最大的收獲。她說(shuō)，“作為一個(gè)教練，我見(jiàn)過(guò)各種運(yùn)動(dòng)程度的人，每個(gè)人都在努力達(dá)到自己最好狀態(tài)?！?/p>

他們都有一個(gè)共同點(diǎn)：對(duì)小小的額外鼓勵(lì)的感激?！白罱以诘却粋€(gè)客戶展示她的課程，但是她遲到了，”Gianesello說(shuō)道，“我打電話給她想知道發(fā)生了什么，結(jié)果她說(shuō)她在家里，耽擱了。她說(shuō)，‘你可以過(guò)來(lái)對(duì)我進(jìn)行測(cè)試。我來(lái)不了了?！艺f(shuō)，‘不行，我這里的健身球、啞鈴和所有的東西，都準(zhǔn)備好了。只要來(lái)半個(gè)小時(shí)就可以了?！笨蛻裘銖?qiáng)答應(yīng)來(lái)上了一節(jié)30分鐘的課程。最終，她非常感激Gianesello堅(jiān)持的勸說(shuō)。“她承認(rèn)，出門(mén)運(yùn)動(dòng)總比呆在家里吃垃圾食品、自暴自棄好得多。我喜歡這句，‘當(dāng)然，你可以做到！’”

堅(jiān)持到底：諷刺的是，雖然她已經(jīng)是一個(gè)持照教練，要保持自己的健身水準(zhǔn)卻比把它當(dāng)成一種業(yè)余愛(ài)好更具困難。Gianesello說(shuō)“我每天都過(guò)得很充實(shí)，上午9點(diǎn)我有一個(gè)客戶，11點(diǎn)又有另外一個(gè)。在兩個(gè)客戶之間，我會(huì)擠一點(diǎn)時(shí)間出來(lái)鍛煉一下?！彼窦?lì)別人一樣鼓勵(lì)自己：花時(shí)間欣賞自己手臂的曲線，和跑步鍛煉出來(lái)的肌肉，這也是她最喜歡的有氧運(yùn)動(dòng)。